1. 百螢Annexin V-iFluor 700標記簡介及應(yīng)用

Annexin V是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（PS）高親和力特異性結(jié)合。在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。用標記了熒光素的Annexin V作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。

Annexin V-iFluor 700標記是美國AAT Bioquest研發(fā)的用于檢測細胞功能的探針，膜聯(lián)蛋白是鈣依賴性磷脂結(jié)合蛋白家族。 它們富含真核生物，屬于參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的普遍存在的細胞質(zhì)蛋白家族。 膜聯(lián)蛋白V的優(yōu)先結(jié)合配偶體是磷脂酰絲氨酸（PS），其通常保持在細胞膜的內(nèi)葉（細胞質(zhì)側(cè)）。 在細胞凋亡中，PS被轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外部小葉。 磷脂酰絲氨酸在細胞表面上的出現(xiàn)是細胞凋亡的初始/中間階段的通用指示，并且可以在觀察到形態(tài)變化之前檢測到。 我們的膜聯(lián)蛋白V結(jié)合物是一組監(jiān)測細胞功能的工具，旨在通過測量磷脂酰絲氨酸的易位來監(jiān)測細胞凋亡。

膜聯(lián)蛋白V結(jié)合物在Ca2+存在下與凋亡細胞表面上的PS結(jié)合，它也可以通過壞死細胞膜或死細胞并與細胞內(nèi)部的PS結(jié)合。 因此，我們建議將細胞不可滲透的核染色與膜聯(lián)蛋白V結(jié)合物結(jié)合使用，以區(qū)分死細胞和凋亡細胞。 

2. Annexin V-iFluor 700標記參數(shù)

E x (nm)        690

E m (nm)      713

分 子 量      ～36000

溶    劑      Water

存儲條件      在零下15度以下保存，避免光照

3. 適用儀器

（1）流式細胞儀

E x:640nm

E m:730/45nm

通道:Alexa Flour-700通道

（2）熒光顯微鏡

     推薦孔板：黑色透明底板

4.參考文獻

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)