小鼠胚胎成纖維細胞MEF
小鼠胚胎成纖維細胞MEF種屬鑒定安為生物
小鼠胚胎成纖維細胞MEF
MEF【MEF】
l細胞鑒定
種屬鑒定已通過
l細胞來源
國家資源庫
l細胞背景
取孕9天的615小鼠胚胎，去除腦、心臟等培養(yǎng)建立。該細胞可用作飼養(yǎng)層細胞，支持胚胎干細胞ES的生長并維持ES未分化的狀態(tài)。當作為飼養(yǎng)層細胞時，MEF需經(jīng)絲裂mei素C處理停止生長。建議作為ES細胞的飼養(yǎng)層時，MEF不要超過6代。
l細胞特性
1）來源：小鼠胚胎
2）形態(tài)：成纖維細胞樣，貼壁生長
3）含量：>1x106細胞數(shù)
4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途：僅供科研使用
l培養(yǎng)條件
1）準備D/F12（推薦awcell-0005）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
l注意事項
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10?S的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。
l運輸形式
低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
常溫:（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
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